جداسازی و کلونینگ ژن آلفا-آمیلاز باکتری باسیلوس سابتیلیس dr8806 درbl21 e. coli

thesis
abstract

در این پژوهش، ژن آلفا-آمیلاز سویه گرمادوست bacillus subtilis dr8806 از چشمه دیگ رستم، با استفاده از آغازگرهای لینکردار حاوی جایگاه های برشی bamhi و hindiii جداسازی شد. ژن amy88 با اندازه 2004 جفت باز، به منظور همسانه‏سازی و تعیین توالی در حامل ptz57r/t جاگذاری و در باکتری escherichia coli dh5? کلون گردید. با استفاده از روش کلونی pcr و هضم آنزیمی حضور ژن هدف در ناقل مربوطه تأیید شد.جاگذاری ژن آلفا-آمیلاز درون ناقل بیانی pet28a(+) برش خورده انجام شد وسازه نوترکیب به میزبان e.coli bl21(de3) انتقال یافت. بیان ژن آلفا-آمیلاز تحت کنترل پروموتر t7توسط القاگر iptg با غلظت نهایی 1میلی‏مولاردر دمای c° 25 انجام شد.آنزیم نوترکیب دارای برچسب 6xhis-tag در انتهای آمین با کروماتوگرافی تمایلی ni2+-nta تخلیص شد. ضریب خالص سازی‏ آنزیمبا فعالیت ویژهu/mg 3272، برابر با20 بود. بر اساس sds-page، وزن مولکولی آنزیم آمیلاز 76 کیلودالتون تخمین زده شد.آنزیم نوترکیب با حداکثر فعالیت در 5 ph و دمای °c 70 و نیمه عمر 125 دقیقه، در گستره وسیعی از ph و دما فعال بود. فعالیت آمیلاز گرمادوست در حضور یون‏های سدیم، پتاسیم و کلسیم افزایش یافت، اما یون های روی، سرب و جیوه سبب مهار فعالیت آنزیم شدند. افزون بر این، آمیلاز پایداری بالایی را در برابر sds و اوره در غلظت های 1 و 5 میلی مولار نشان داد. نتایج، پایداری و افزایش فعالیت آنزیم در حضور حلال های آلی را نشان داد. پس از انکوباسیون آنزیم در حضور مایعات یونی بر پایه ایمیدازول، بیشترین فعالیت باقی مانده در مایع یونی 1-بوتیل 3- متیل ایمیدازولیوم کلراید مشاهده شد. با توجه به ویژگی هایی مانند پایداری حرارتی بالا، فعالیت در ph اسیدی و مقاومت به حلال های آلی، آنزیم ?- آمیلاز نوترکیب dr8806می تواند گزینه ای مناسب برای کاربردهای صنعتی به ویژه در صنایع غذایی باشد.

similar resources

جداسازی و کلونینگ ژن لیپاز باکتری باسیلوس سابتیلیسdr8806 در e. coli bl21

در این مطالعه، ژن کد کننده آنزیم لیپاز باکتری bacillus subtilis dr8806 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی لینکردار دارای جایگاه برش برای آنزیم های محدوالاثر bamh? و hind??? جداسازی و در وکتور همسانه سازی ptz57r/t کلون گردید. پس از تاًیید صحت کلونینگ توسط کلونی pcrو برش آنزیمی، پلاسمیدهای نوترکیب حامل ژن هدف به منظور تعیین توالی مورد استفاده قرار گرفتند. توالی ژن لیپاز دارای موتیف حفاظت شده ser-met-...

کلونینگ توالی های ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انتریتیدیس در باکتری E. coli

عفونت های سالمونلایی در تمامی نقاط دنیا در میزبان های بسیاری همچون حیوانات اهلی، وحشی و انسان باعث بروز بیماری می شوند. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلول های میزبان شرط لازم برای بیماری زایی گونه های سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماری زایی مهم است که توسط باکتری به سلول های میزبان منتقل می شود. این مطالعه با هدف کلون سازی نواحی ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انترتیدیس و شناسای...

full text

کلونینگ توالی های ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انتریتیدیس در باکتری E. coli

عفونت های سالمونلایی در تمامی نقاط دنیا در میزبان های بسیاری همچون حیوانات اهلی، وحشی و انسان باعث بروز بیماری می شوند. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلول های میزبان شرط لازم برای بیماری زایی گونه های سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماری زایی مهم است که توسط باکتری به سلول های میزبان منتقل می شود. این مطالعه با هدف کلون سازی نواحی ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انترتیدیس و شناسای...

full text

کلونینگ و امکان سنجی بیان ژن فیتاز از باکتری باسیلوس سابتیلیس

فیتات منبع عمده تأمین فسفر در جیره حیوانات مزرعه ای می باشد. این ترکیب دسترسی زیستی به مواد معدنی، پروتئین ها و کربوهیدرات ها را کاهش می دهد. آنزیم فیتاز با تجزیه فیتات، باعث کاهش اثر ضد تغذیه ای آن می شود. میکروارگانیسم ها بهترین منبع تولید تجاری این آنزیم محسوب می شوند. فیتاز تولید شده توسط باسیلوس سابتیلیس برای استفاده در صنعت مناسب می باشد. در این مطالعه به منظور همسانه سازی و بررسی امکان ت...

15 صفحه اول

کلونینگ، بیان و تعیین خصوصیات لیپاز کایمریک باسیلوس ترموکاتنولاتوس در باکتری Escherichia coli

لیپازهای باکتریایی عضوی از خانواده β/α هیدرولازها هستند که تری آسیل گلیسرول ها را در فاز بین آب-چربی هیدرولیز می کنند. لیپاز باکتری باسیلوس ترموکاتنولاتوس (BTL2) در دمای 75-60 درجه سانتیگراد و pH برابر 10 -8 فعالیت دارد و مناسب استفاده در صنعت شوینده می باشد. در این پژوهش لیپاز باسیلوس ترموکاتنولاتوس کایمریک حاوی توالی توافق شده لیپاز قارچ کاندیداروگوزا (207Gly-Glu-Ser-Ala-Gly211)در ناحیه زانو...

full text

جداسازی یک سویه بومی باسیلوس لیکنی‌فورمیس تولید کننده آنزیم آلفا آمیلاز از منابع گرم استان سمنان

مقدمه و هدف: آمیلاز یکی از آنزیم‌های صنعتی مهم می‌باشد که در صنایع غذایی، تولید  شوینده ها، تولید گلوکز، نساجی و کاغذ‌سازی کاربرد دارد. باسیلوس‌ها، از مهم‌ترین میکروارگانیسم‌های تولید کننده آمیلاز و پروتئاز می‌باشند. هدف از این پژوهش جداسازی باسیلوس گرمادوست مولد آنزیم آلفا- آمیلاز از منابع گرم استان سمنان و تعیین فعالیت آنزیم آلفا- آمیلاز می‌باشد. مواد و روش‌ها:...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده علوم

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023